Soluções para SDS-PAGE | |||||||||
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30% (p/v) de acrilamida
0,8% (p/v) de bis-acrilamida
Adicionar 0,5g de resina (Dowex – MR3) para cada 100 mL de solução
e agitar por 10 min.
Armazenar refrigerado em frasco escuro.
B) Solução tampão 4X para gel de corrida:
1.5M de Tris pH 8,8
0,4% de SDS
Acertar o pH com HCl 6N antes de adicionar o SDS.
C)Solução de acrilamida para gel de empilhamento:
30% (p/v) de acrilamida
1,6% (p/v) de bis-acrilamida
Adicionar 0,5g de resina (Dowex – MR3) para cada 100 mL de solução
e agitar por 10 min.
Armazenar refrigerado em frasco escuro.
D) Solução tampão 4X para gel de empilhamento:
0.5M de Tris pH 6,8
0,4% de SDS
Acertar o pH com HCl 6N antes de adicionar o SDS.
E) Solução tampão de corrida
4X:
Tris | 12,0 g |
Glicina | 57,6 g |
H2O qsp | 1 L |
O pH deve estar em torno de 8,6, não deve ser necessário ajustá-lo.
F) Tampão de amostra 2X:
Solução estoque:
Solução D | 1,25 mL |
Glicerol (600) | 1,50 mL |
SDS (20%) | 1,00 mL |
H2O | 0,05 mL |
Volume final | 3,80 mL |
quando for usar:
3,8 mL da solução estoque
1,0 mL de azul de bromofenol 0,1%
0,2 mL de ß-mercaptoetanol
G) Solução para coloração:
0,3% de azul de Coomassie R-250
50% de metanol ou etanol
10% de ácido acético
H2O qsp ---- 1L
H) Solução para descoloração:
10% de etanol
7% de ácido acético
H2O qsp ---- 1L
SDS-PAGE
Running gel
9,0% | 8,5% | 7% | |
Sol A | 14,6 mL | 13,8 mL | 11,36 mL |
Sol B | 12,5 mL | 12,5 mL | 12,5 mL |
H2O | 22,7 mL | 23,5 mL | 25,94 mL |
PA 10% | 150 µL | 150 µL | 150 µL |
TEMED | 50 µL | 50 µL | 50 µL |
Volume final | 50 mL | 50 mL | 50 mL |
Stacking gel
Sol C | 1,875 mL |
Sol D | 3,75 mL |
H2O | 9,3 mL |
PA 10% | 45 µL |
TEMED | 30 µL |
Volume final | 15 mL |
Tampão de corrida 1X:
Tampão 4X | 425 mL |
SDS 20% | 8,5 mL |
H2O qsp | 1,7 L |
Espessura do gel | Pentes | Volume/poço (µL) | Volume de gel (mL) |
0,8 mm | 12 | 72 | 5 - Stacking 25 - Running |
14 | 59 | ||
20 | 34 | ||
1,5 mm | 12 | 135 | 10 - Stacking 45 - Running |
14 | 110 | ||
20 | 20 | ||
Volume tampão --- 1700 mL |