Soluções para SDS-PAGE
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A) Solução estoque de acrilamida para gel de corrida:

30% (p/v) de acrilamida
0,8% (p/v) de bis-acrilamida

Adicionar 0,5g de resina (Dowex – MR3) para cada 100 mL de solução e agitar por 10 min.
Armazenar refrigerado em frasco escuro.

B) Solução tampão 4X para gel de corrida:

1.5M de Tris pH 8,8

0,4% de SDS

Acertar o pH com HCl 6N antes de adicionar o SDS.

C)Solução de acrilamida para gel de empilhamento:

30% (p/v) de acrilamida

1,6% (p/v) de bis-acrilamida

Adicionar 0,5g de resina (Dowex – MR3) para cada 100 mL de solução e agitar por 10 min.
Armazenar refrigerado em frasco escuro.

D)    Solução tampão 4X para gel de empilhamento:

0.5M de Tris pH 6,8

0,4% de SDS
Acertar o pH com HCl 6N antes de adicionar o SDS.

E)    Solução tampão de corrida 4X:
 

Tris  12,0 g
Glicina  57,6 g
H2O qsp  1 L

O pH deve estar em torno de 8,6, não deve ser necessário ajustá-lo.

F)     Tampão de amostra 2X:

Solução estoque:
 

Solução D  1,25 mL
Glicerol (600)    1,50 mL
SDS (20%)  1,00 mL
H2O 0,05 mL
Volume final  3,80 mL

quando for usar:

3,8 mL da solução estoque

1,0 mL de azul de bromofenol 0,1%

0,2 mL de ß-mercaptoetanol

G) Solução para coloração:

0,3% de azul de Coomassie R-250

50% de metanol ou etanol

10% de ácido acético

 H2O qsp ---- 1L

H) Solução para descoloração:

10% de etanol

7% de ácido acético

H2O qsp ---- 1L

SDS-PAGE

Running gel
 
 

  9,0%  8,5% 7%
Sol A  14,6 mL 13,8 mL 11,36 mL
Sol B  12,5 mL 12,5 mL 12,5 mL
H2O 22,7 mL 23,5 mL 25,94 mL
PA 10%  150 µL 150 µL 150 µL
TEMED  50 µL 50 µL 50 µL
Volume final  50 mL 50 mL 50 mL

Stacking gel
 

Sol C  1,875 mL
Sol D  3,75 mL
H2O 9,3 mL
PA 10%  45 µL
TEMED  30 µL
Volume final    15 mL

Tampão de corrida 1X:
 

Tampão 4X    425 mL
SDS 20%    8,5 mL
H2O qsp 1,7 L
 
Cubas V16-2 Gibco
 
Espessura do gel Pentes Volume/poço (µL) Volume de gel (mL)
0,8 mm 12 72 5 - Stacking
   
25 - Running
14 59
20 34
1,5 mm 12 135 10 - Stacking
   
45 - Running
14 110
20 20
Volume tampão --- 1700 mL